Calcular los títulos de virus es una forma complicada de decir que un científico está contando la cantidad de virus en una muestra en particular. Para calcular los títulos de virus, los científicos infectan placas de bacterias en crecimiento con soluciones de virus en concentraciones variables y calculan la cantidad de virus en la solución original contando las bacterias que murieron debido a la infección viral.

Diluciones en serie

Póngase guantes, llene 10 tubos de cultivo con 9 ml de caldo y etiquételos "10 ^ -1", "10 ^ -2", "10 ^ -3", y así sucesivamente hasta que "10 ^ - 10. "Estos tubos se usarán para diluciones seriales virales. Dado que los virus pueden crecer a concentraciones increíblemente altas, debe diluirlos para contarlos de manera efectiva. Cada tubo representa una dilución diez veces mayor del virus.

Tome 1 ml del cultivo de virus que desee valorar y transfiéralo al tubo titulado "10 ^ -1" con una pipeta. Mezcle bien el tubo. Esta es su primera dilución de diez veces.

Tome 1 ml del cultivo mixto de su tubo con la etiqueta "10 ^ -1" y transfiéralo con una nueva pipeta al siguiente tubo, con la etiqueta "10 ^ -2 . "Mezcle este tubo también.

Continúe este patrón para crear una serie de dilución en serie. Usted terminará con 9 tubos de 9 ml y 1 tubo de 10 ml. Las cargas virales en sus tubos se diluirán en cualquier lugar desde 10 veces (su primer tubo) o 100 veces (su segundo tubo) hasta diez mil millones de veces (su tubo final).

Preparación de placas

Tome 10 tubos de agar blando triptona y 10 placas de Petri y etiquételos para que se correspondan con sus tubos de dilución en serie.

Afloje las tapas para que no salgan con el calor y luego coloque los tubos de agar en un vaso de precipitados de agua hirviendo Esto derretirá el agar para que pueda verterlo en las placas de Petri.

Transfiera sus tubos a un baño de agua caliente a un mínimo de 45 grados Celsius. Esto asegurará que su agar no se solidifique en los tubos antes de que tenga la oportunidad de verterlo en una placa de Petri.

Agregue dos gotas de cultivo bacteriano a su agar y mezcle con cuidado. Estas son las bacterias que se matarán, lo que le permite contar la cantidad de partículas de virus en una solución particular.

Agregue 1 ml de cada dilución en serie a su tubo de agar correspondiente mientras los tubos estén todavía en agua caliente. bañera. Por ejemplo, 1 ml de su dilución en serie de 10 ^ -1 debe ir al tubo de agar con la etiqueta "10 ^ -1".

Mezcle cada tubo y luego vierta cada tubo en la placa de Petri con la etiqueta correspondiente. Esto creará una capa delgada de agar que ha sido inoculada con bacterias y virus en cada placa. Deja que las placas crezcan durante la noche en una incubadora.

Contando y calculando títulos.

Saca tus platos de la incubadora y examínalos. Debería ver áreas nubladas en toda la placa donde crecieron las bacterias, a excepción de las pequeñas manchas claras llamadas placas. Estas placas son parches de bacterias muertas, y cada placa representa un virus.

Busque un plato que tenga entre 30 y 300 placas y cuente el número exacto de placas en ese plato.

Tome el número de placas en su plato y multiplique por 10. Si contara 157 placas, obtendría 1570.

Multiplique el número que obtuvo en el paso anterior por el inverso del número en su tubo de dilución. Por ejemplo, si la placa que seleccionó era la placa 10 ^ -5, multiplicaría 1570 por 10 ^ 5 para obtener 157000000. Este número final es su título de virus y representa la cantidad de virus por ml de su cultivo original.

Advertencia

Tenga cuidado cuando trabaje con virus. No todos los virus son peligrosos, pero debes tomar precauciones. Cambia tus guantes a menudo. Limpie cualquier derrame inmediatamente y desinfecte el área.