La cromatografía líquida de alta resolución es una técnica para el análisis de laboratorio de una mezcla. Es un tipo eficiente de cromatografía que utiliza alta presión, en lugar de simplemente gravedad, para impulsar una muestra de una mezcla a través de una columna. Se inyecta una muestra, luego una bomba que contiene altas cantidades de presión ayuda a mover la muestra a lo largo de una columna empacada, donde se separa en componentes individuales. Esta separación es luego analizada por un detector para obtener resultados.

Sitio de inyección

Para poder inyectarse en una HPLC, una muestra debe disolverse primero en un solvente líquido polar, preferiblemente uno con espectros de HPLC conocidos para que sus datos puedan distinguirse de los de la muestra. La solución líquida que contiene la muestra se coloca en el instrumento y se envía a la columna. La ubicación real del sitio de inyección depende de la marca de los instrumentos. En la mayoría de los casos, el proceso de inyección es automático, pero en algunos casos un técnico de laboratorio debe inyectar la muestra con una aguja de jeringa pequeña.

Componente de bomba

El componente de bomba de la unidad de HPLC es necesario porque proporciona la presión que impulsa la muestra a través de la columna. La fuerza de la bomba varía, pero una potente puede producir una presión de hasta 6.000 psi, o libras por pulgada cuadrada, que se aplica después de inyectar la muestra. Esto permite que la muestra pase a través de la columna más rápida y eficientemente que si goteara utilizando solo la fuerza de la gravedad.

Descripción de la columna

La velocidad aumentada de una muestra que pasa a través del la columna mediante una bomba permite el uso de un tipo diferente de columna que las utilizadas en la cromatografía líquida simple. El material de embalaje en la columna puede tener un tamaño de partícula mucho más pequeño, lo que aumenta el área de superficie y, por lo tanto, ayuda a las interacciones de la muestra con la columna. La mayoría de las columnas de HPLC funcionan a través de la polaridad. La muestra se disuelve en un solvente polar, y la columna se compone de hidrocarburos en gran parte no polares. Las partes polares de la molécula de muestra pasan a través de la columna muy rápidamente porque están interactuando principalmente con el solvente, mientras que los componentes no polares de la muestra permanecen en la columna, formando interacciones débiles con los componentes de la columna. Por lo tanto, los componentes de la muestra salen de la columna en orden de la más polar a la mayoría no polar.

Detector Function

Los detectores también varían según el tipo de instrumento de HPLC que se utilice. Sin embargo, la mayoría funcionan de la misma manera básica. Una fuente de luz ultravioleta brilla sobre los componentes de muestra separados a medida que salen de la columna. La mayoría de los compuestos orgánicos absorben una cierta cantidad de luz, de modo que cuando pasan por el haz de luz aplicado, un detector puede captar cuánta luz se absorbe. El detector también registra el tiempo de retención de los componentes según el orden en que salen de la columna. Este resultado se puede analizar en función del área del pico para determinar la naturaleza exacta de los componentes de la muestra.