Introducción:
Este experimento explora el efecto del pH sobre la descomposición enzimática del peróxido de hidrógeno (H₂O₂) por catalasa, una enzima que se encuentra en las hojas de espinacas. La catalasa acelera la descomposición de H₂O₂ en agua (H₂O) y oxígeno (O₂), una reacción vital para proteger las células del daño oxidativo.
Materiales:
* Hojas de espinacas (frescas o congeladas)
* Licuadora o mortero y mano
* Filtro de queso o café
* Tubos de ensayo (al menos 5)
* Cilindro graduado
* Vasos
* Peróxido de hidrógeno (3%)
* Soluciones de tampón de pH (ph 4, 6, 8, 10)
* Cuentagotas o pipeta
* Cronómetro
* Termómetro
Procedimiento:
1. Preparar extracto de espinacas:
* Lave bien las hojas de espinacas.
* Mezcle o muele las hojas con una pequeña cantidad de agua destilada para crear una suspensión gruesa.
* Filtre la lechada a través de la queso o un filtro de café para obtener un extracto verde.
2. Prepare soluciones de amortiguación:
* Use soluciones de amortiguación de pH disponibles comercialmente o prepare los suyos utilizando productos químicos y procedimientos apropiados.
3. Configurar tubos de ensayo:
* Etiquete cinco tubos de ensayo (1-5) y agregue 5 ml de lo siguiente a cada uno:
* Tubo 1:solución de tampón PH 4
* Tubo 2:solución de tampón PH 6
* Tubo 3:solución de tampón PH 8
* Tubo 4:solución de tampón pH 10
* Tubo 5:agua destilada (control)
4. Agregar extracto de espinacas:
* Agregue 1 ml de extracto de espinacas a cada tubo de ensayo.
5. Agregar peróxido de hidrógeno:
* Agregue 1 ml de peróxido de hidrógeno al 3% a cada tubo de ensayo simultáneamente, usando un gotero o pipeta.
6. Observe y registrar datos:
* Inicie el cronómetro inmediatamente después de agregar peróxido de hidrógeno.
* Observe la cantidad de burbujas (gas oxígeno) producido en cada tubo de ensayo.
* Registre el tiempo tardado para cada tubo de ensayo para producir una cantidad específica de burbujas (por ejemplo, 5 burbujas).
* Registre la temperatura de cada tubo de ensayo usando un termómetro.
7. Experimento de repetición:
* Repita los pasos 1-6 al menos tres veces para garantizar que los resultados sean consistentes.
Análisis de datos:
* gráfico: Trace el tiempo necesario para producir una cantidad específica de burbujas contra el pH de la solución.
* Observaciones: Analice las diferencias en las tasas de producción de burbujas entre los diferentes niveles de pH.
* Conclusiones: Dibuje conclusiones sobre el efecto del pH sobre la actividad de la catalasa, la enzima responsable de descomponer el peróxido de hidrógeno.
Resultados esperados:
La catalasa es más activa dentro de un rango de pH específico, típicamente alrededor del pH 7. Por lo tanto, debe observar el burbujeante más vigoroso en el tubo de ensayo con el pH más cercano a 7. Los tubos con valores de pH más altos o más bajos exhibirán velocidades de reacción más lentas.
Precauciones de seguridad:
* Use gafas de seguridad y guantes apropiados al manejar peróxido de hidrógeno y productos químicos.
* No ingiere ni inhale las soluciones.
* Deseche los productos químicos adecuadamente siguiendo las regulaciones de seguridad.
Exploración adicional:
* Investigue el efecto de la temperatura sobre la actividad de la catalasa.
* Explore la actividad de la catalasa en otros extractos de plantas.
* Investigue el mecanismo de acción de la catalasa y su papel en los sistemas biológicos.
Este experimento proporciona una base valiosa para comprender la importancia del pH en los sistemas biológicos y el papel de las enzimas en las reacciones bioquímicas catalizantes.
