1. Tampón de lisis:
* función: Rompe las células abiertas y libera el ADN.
* Componentes:
* Detergente: Interrumpe las membranas celulares (por ejemplo, SDS, Triton X-100).
* sal: Ayuda a neutralizar las moléculas cargadas y estabilizar el ADN (por ejemplo, NaCl).
* Tris Buffer: Mantiene el pH para una actividad enzimática óptima.
* edta: Agente quelante que se une a cationes divalentes como el magnesio, evitando la degradación del ADN por las ADNasas.
2. Proteinasa K:
* función: Digesta proteínas, incluidas las histonas que se unen al ADN.
* Mecanismo: Una serina proteasa que corta los enlaces de péptidos dentro de las proteínas.
* Propósito: Elimina proteínas que puedan interferir con el aislamiento de ADN y la purificación.
3. Fenol/cloroformo:
* función: Separa el ADN de las proteínas y otros restos celulares.
* Mecanismo: Las proteínas de la denitud de fenol y las hacen insolubles, mientras que el cloroformo actúa como un desnaturalizante y ayuda a separar las fases acuosas y orgánicas.
* Procedimiento: Después de agitar vigoroso, la mezcla se separa en tres capas:
* Capa superior:fase acuosa que contiene ADN.
* Capa media:interfase que contiene proteínas desnaturalizadas.
* Capa inferior:fase orgánica que contiene fenol/cloroformo.
* El ADN se recupera de la capa acuosa.
4. Etanol/isopropanol:
* función: Precipita el ADN de la solución.
* Mecanismo: El ADN es soluble en agua pero insoluble en etanol o isopropanol. Cuando se agregan, estos alcoholes reducen la solubilidad del ADN, lo que hace que precipite fuera de solución.
* Procedimiento: Después de agregar etanol o isopropanol, la mezcla se centrifugó para recolectar el pellet de ADN.
5. TE buffer:
* función: Repone y almacena ADN después de la extracción.
* Componentes:
* Tris Buffer: Mantiene el pH para una estabilidad óptima del ADN.
* edta: Agente quelante que inhibe las DNasas.
* Propósito: Asegura que el ADN permanezca intacto y protegido de la degradación durante el almacenamiento.
6. RNase A:
* función: Elimina la contaminación de ARN.
* Mecanismo: Una enzima que degrada específicamente el ARN.
* Propósito: Asegura una muestra de ADN puro para aplicaciones aguas abajo como PCR o secuenciación.
nota: Algunos protocolos pueden usar otros productos químicos como el clorhidrato de guanidina o el tiocianato de guanidina para la lisis, o columnas de sílice para la unión y purificación del ADN en lugar de fenol/cloroformo.
