Por Chris Deziel Actualizado el 24 de marzo de 2022
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Teñir una muestra antes del examen microscópico mejora principalmente la visibilidad, pero sus beneficios se extienden mucho más allá de delinear los límites celulares.
Ciertos tintes impregnan las paredes celulares, iluminando las estructuras internas y permitiendo a los investigadores observar la actividad metabólica in situ.
Además, las tinciones discriminan entre células viables y no viables.
Además, la tinción facilita la enumeración precisa de poblaciones de células específicas dentro de una biomasa determinada.
Hay disponibles más de 20 reactivos de tinción distintos, cada uno de ellos diseñado para un objetivo de investigación o diagnóstico particular.
La tinción acentúa las estructuras celulares; La selección del reactivo depende del objetivo analítico.
La elección del tinte depende de la característica específica que desees visualizar. No todas las tinciones son compatibles con las células vivas, pero aquellas que lo son (incluido el marrón Bismarck, el rojo tolueno, el azul Nilo, el rojo Nilo y los fluorescentes que se unen al ADN) se utilizan ampliamente en citología e histología.
Algunos tintes se dirigen a las esporas, otros resaltan lípidos o proteínas, mientras que algunos cambian de color en presencia de almidones. Por ejemplo, un médico que realiza una prueba de Papanicolaou aplicaría EosinY, un tinte fluorescente ácido que se vuelve rojo brillante contra los glóbulos rojos, el citoplasma y las membranas celulares. La eosina Y también se utiliza habitualmente en el análisis de aspirados de médula ósea.
En muchos casos, una sola mancha es insuficiente. La hematoxilina, por ejemplo, tiñe los núcleos de azul y, cuando se combina con la eosina, produce un fondo rojo o rosa contrastante que hace que los núcleos se destaquen claramente. La tinción combinada de hematoxilina-eosina (H&E) es un elemento básico en patología para examinar la arquitectura del tejido.
El procedimiento de tinción de Gram es una piedra angular de la microbiología clínica, ya que permite una rápida identificación de patógenos bacterianos. La técnica emplea una serie de colorantes que tiñen de manera diferencial organismos Gram positivos y Gram negativos.
Primero, se aplica cristal violeta, tiñendo todas las células de un violeta uniforme. A continuación, el yodo actúa como mordiente, fijando el tinte en las gruesas capas de peptidoglicano de las bacterias grampositivas (normalmente estafilococos y estreptococos), de modo que el violeta permanece después de la decoloración. Finalmente, una contratinción como SafranineO imparte un tono rojo o rosado a las células Gram negativas, creando un claro contraste entre los dos grupos.
La preparación de la muestra puede implicar montaje en seco, montaje en húmedo, corte o untado. Para la mayoría de los protocolos de tinción, se prefiere una preparación húmeda:coloque una gota de agua destilada en el portaobjetos, coloque la muestra y cúbrala con un cubreobjetos. Aplique una gota de la solución colorante en una esquina; La acción capilar atrae el tinte a través de la muestra. Colocar una toalla de papel en el lado opuesto del portaobjetos ayuda a absorber el exceso de líquido, asegurando una distribución uniforme. Una vez que el tinte haya penetrado completamente, el portaobjetos estará listo para la evaluación microscópica.
