Las bacterias se cultivan en placas de Petri en un medio sólido conocido como agar bacteriano, donde se forman colonias circulares elevadas. A diferencia de una célula bacteriana individual, una colonia es un grupo de bacterias lo suficientemente grande como para ser visible a simple vista. El crecimiento bacteriano puede medirse por simple observación de cuántas colonias están presentes; sin embargo, los métodos más cuantitativos incluyen el uso de una cámara de recuento, o más a menudo, conteos de placas viables. Este último se usa con mayor frecuencia, ya que también proporciona información cualitativa, como el efecto de condiciones de crecimiento variables. Debido a que puede haber miles de millones de bacterias en una placa de Petri, la medición primero requiere diluir la muestra para que sea posible contar el número de colonias.
En un tubo de ensayo, agregue 10 microlitros del cultivo bacteriano inicial a 90 microlitros de medio de dilución. Cierre la tapa del tubo con fuerza y agite suavemente para obtener una mezcla homogénea. Ahora la muestra es una décima parte de su concentración original.
Transfiera 10 microlitros de esta nueva muestra a un nuevo tubo de ensayo que contiene 90 microlitros de medio de dilución, mezcle de nuevo. Una vez más, el resultado será la muestra más diluida, ahora será una centésima parte de su concentración original. Repita esto varias veces, hasta que la muestra original se haya diluido entre 10 4 y 10 10 veces. Asegúrese de que cada tubo esté etiquetado con la dilución correcta, por ejemplo 10 -1, 10 -2 y así sucesivamente. Distribuya 10 microlitros de la última dilución completada en la placa de agar. Usando el borde de extensión, distribuya la solución bacteriana a través de toda la superficie de la placa de agar. Repita esto para dos placas más. También es común realizar estos pasos con otros niveles de dilución para comparar. Asegúrese de etiquetar las partes inferiores de las placas. Vuelva a colocar las tapas en cada placa y deje que las placas de agar se sequen durante varios minutos, ya sea en un banco de laboratorio debajo de una llama, o en una incubadora. Coloque las placas en la incubadora que debe ajustarse a la temperatura adecuada para la tensión de las bacterias. Dejar crecer durante 12 a 16 horas. Las colonias deben ser visibles después de 16 horas; sin embargo, algunas modificaciones genéticas pueden requerir más tiempo (por ejemplo, desarrollo del color). Cuando las colonias son observables, saque las placas y encuentre las que tengan entre 30 y 300 colonias. Usando un marcador permanente, coloque un punto en la parte inferior de la placa de Petri, el lado con el agar, no la tapa, donde sea que una colonia sea visible a través del agar. Cuente cada punto marcador. Repita para cada plato. Para medir la cantidad de bacterias en el cultivo inicial para este experimento, la dilución debe invertirse en los cálculos, en dos lugares. En primer lugar, cuando tomaste un microlitro del tubo de ensayo para colocar la placa de Petri, tomaste una décima parte de la muestra diluida, por lo que necesitas multiplicar todo por 10 para revertir eso. Además, si el factor de dilución en el tubo de ensayo fue, por ejemplo, 10 -7, entonces el número de colonias se debe multiplicar por 10 7 para invertir el efecto de dilución. Simplemente elimine el signo negativo del exponente en los cálculos. Usa la fórmula: [Número de colonias contadas] × 10 × [cuántas veces debe multiplicarse la muestra para llegar a la concentración original: por ejemplo, 10 5] = Número de unidades formadoras de colonias (UFC) por mililitro de cultivo inicial. Este es el crecimiento bacteriano en sus placas de Petri. TL; DR (Demasiado Largo; No Leído) Asegúrese de esterilizar el esparcidor de vidrio sumergiendo el borde de extensión en 70 por ciento de etanol e insertándolo en una llama de mechero Bunsen. Permita que el etanol se prenda fuego y lentamente queme el alcohol, lo que matará toda contaminación bacteriana. Toque suavemente la parte seca (es decir, sin bacterias) del agar para enfriarlo: el agar no se derrite al contacto. Advertencia Trate cualquier bacteria como si fuera potencialmente patogénico, y utiliza procedimientos de seguridad de laboratorio adecuados.
