¿Alguna vez se ha preguntado cómo los científicos estudian pequeños fragmentos como su ADN? Un método es la electroforesis en gel. Mientras que la electroforesis generalmente produce bandas claras y fáciles de leer, perfectas para la interpretación científica, los resultados borrosos a veces oscurecen los datos.
TL; DR (Demasiado largo; No leído)
Electroforesis en gel permite a los científicos visualizar muestras digeridas y medir el tamaño de los fragmentos. Resultados de manchas de geles de agarosa impropiamente preparados, cargando una muestra sin diluir en los pozos o utilizando muestras de mala calidad.
¿Qué es la electroforesis?
La electroforesis en gel es una forma para que los científicos visualicen muestras digeridas de pequeños moléculas como el ADN y estimar el tamaño de esos fragmentos. Para realizar la electroforesis, los científicos preparan un gel suspendiendo la agarosa en agua hirviendo. La polimerización resultante produce polímeros de azúcar entrecruzados de modo que el gel se parece un poco a una tela de araña en el nivel químico.
Los científicos usan un instrumento de corte para formar pocillos en el gel para que puedan cargar cantidades muy pequeñas de muestras digeridas en los pozos Al encender la máquina, la electricidad pasa a través del gel y los fragmentos de las muestras comienzan a viajar desde los pocillos hasta el otro lado del gel. Dado que el gel es similar a una banda, fragmentos más pequeños viajan a través de la matriz rápidamente, mientras que los fragmentos más grandes tardan más en trepar a través de la matriz. Cuando haya terminado, el gel contiene bandas oscuras que representan el recorrido de los diferentes fragmentos. Los científicos miden estas bandas y utilizan un cálculo logarítmico para determinar el tamaño de cada fragmento en función de qué tan lejos migró.
Los científicos esperan bandas claras, pero a veces las bandas difuminan. Este frotis es generalmente el resultado de geles pobremente preparados, cargando muestras sin diluir en los pocillos o muestras de mala calidad.
Preparación Insatisfactoria del Gel
Cuando se trata de resultados manchados, uno de los culpables probablemente es un pobre gel preparado Un gel satisfactorio se polimeriza uniformemente, produciendo una matriz uniforme en todo el gel en la bandeja de colada. Si parte del gel, normalmente la mitad inferior, se pone antes de que el científico termine de verter toda la bandeja, el gel resultante será irregular y arrojará resultados manchados.
Demasiada muestra
Antes de cargar muestras en los pozos, esas muestras deben diluirse lo suficiente para pasar por el gel sin desbordar los pozos. Si una muestra cargada está demasiado concentrada porque el científico olvidó diluirla o utilizó un factor de dilución incorrecto, los fragmentos serán demasiado grandes para los pocillos y producirán manchas.
Muestra de mala calidad de calidad
Manchas también resulta de una calidad de muestra pobre. Por ejemplo, una muestra de ADN contaminada con proteína o que contenga demasiada sal puede producir manchas. Las muestras degradadas o desnaturalizadas también arrojan resultados deficientes, incluidas las bandas untadas.
La electroforesis en gel es una manera asombrosa para que los científicos visualicen las muestras digeridas y determinen el tamaño de los fragmentos. La cuidadosa preparación tanto del gel como de la muestra minimiza la posibilidad de manchas y produce bandas claras ideales para la interpretación científica.
