Una vez que ha ejecutado las muestras de ADN en un gel de agarosa y tomado una fotografía, puede guardar la imagen para más adelante, momento en el que puede analizar los resultados e interpretarlos. El tipo de cosas que estás buscando dependerá de la naturaleza de tu experimento. Si está haciendo una toma de huellas digitales de ADN, por ejemplo, querrá comparar el tamaño de las muestras de ADN de dos muestras, del sospechoso y de la muestra de la escena del crimen, tal vez. Si trabajas con plásmidos de bacterias, por el contrario, es posible que debas asegurarte de que el plásmido contenga el inserto. En consecuencia, la forma en que interpretes tu gel dependerá en parte del experimento que hiciste. No obstante, hay algunas reglas generales que puede aplicar.

Comenzando desde la parte superior de la imagen, mida la distancia a cada banda en el carril "estándar" de su gel (también conocido como la escalera). El carril de estándares contiene piezas de ADN cuyo tamaño ya se conoce, por lo que ya debe saber el tamaño de cada una antes de comenzar su experimento. También mida la distancia recorrida por las bandas en cada una de las líneas de muestra.

Divida la distancia entre cada patrón y cada banda en las muestras recorridas por la distancia hasta el fondo del gel. El resultado se llama movilidad relativa. Puedes usar el programa de hoja de cálculo para hacer la aritmética por ti si hace que este paso sea más rápido.

Introduce la movilidad y el tamaño relativo de cada estándar en tu programa de hoja de cálculo, luego usa la herramienta gráfica del programa de hoja de cálculo para crear un gráfico de estos datos con movilidad relativa en el eje xy tamaño en y.

Ajuste una línea al gráfico usando regresión no lineal. Consulte la sección Ayuda de su programa de hoja de cálculo si necesita saber cómo hacerlo. Debería terminar con una ecuación, tal vez una similar a la siguiente:

y = (0.3) x ^ -2.5

Tenga en cuenta que x aquí será la movilidad relativa, mientras que y es la tamaño. También tenga en cuenta que su ecuación puede tener números completamente diferentes para el exponente y el coeficiente; esta ecuación solo se proporciona como un ejemplo hipotético.

Tome la movilidad relativa de las bandas de su muestra y conéctela como x para calcular el tamaño de las piezas de ADN en las bandas de muestra.

Supongamos que la ecuación derivada de su programa de hoja de cálculo fue realmente y = (0.3) x ^ -2.5, y la movilidad relativa de una banda de muestra particular fue 0.68 . Sustituyendo 0.68 en tu ecuación, encuentras lo siguiente:

y = (0.3) (0.68) ^ - 2.5

Usando tu calculadora, levantas 0.68 al -2.5 y encuentras lo siguiente:

y = (0.3) (2.62)

y = 0.786

que sería entonces el tamaño estimado en kilobases del ADN en una de las bandas de su muestra.

Plásmidos

Tenga en cuenta que puede o no necesitar utilizar las instrucciones de esta sección. La electroforesis en gel de agarosa se usa a menudo para confirmar que un plásmido contiene un inserto dado. Si no está trabajando con plásmidos, puede omitir esta sección. Sin embargo, si lo es, puede seguir estas instrucciones.

Observe que si trabaja con plásmidos cortados o sin cortar, no puede estimar el tamaño utilizando el procedimiento de la sección 1 anterior. Esto se debe a que los plásmidos sin corte y cortados migran a diferentes velocidades con respecto al ADN lineal.

Compare el número de bandas en cada carril. Recuerde que una enzima de restricción corta el ADN en los sitios donde ocurre una secuencia dada llamada sitio de restricción. Si una muestra se tratara con DOS enzimas de restricción, una banda para el inserto y una banda para el resto del plásmido deberían estar ambas presentes. Esto se debe a que el inserto estará flanqueado por dos sitios de restricción, cada uno para una enzima diferente, por lo que los cortes en ambos sitios liberarán el inserto del plásmido. Un corte en un solo sitio, por el contrario, convertirá el plásmido en ADN lineal. Un corte de muestra sin enzimas de restricción o una enzima de restricción, entonces, debería tener una sola banda, mientras que un corte de muestra con dos enzimas de restricción debería tener dos bandas.

Busque bandas creadas por ADN de plásmido mellado. Un plásmido cortado tiene un corte en una sola cadena solamente, por lo que migra más lentamente que un plásmido cortado. Los plásmidos cortados a su vez migran más lentamente que el ADN sin cortar.

Estime el tamaño de la inserción usando el procedimiento descrito en la Sección 1 y determine si coincide con sus expectativas (que variarán según el experimento).