Los científicos usan diluciones seriadas (una serie de diluciones 1:10) para calcular la densidad de población de cultivos bacterianos. Cuando se deposita y se incuba una gota de cultivo que contiene un pequeño número de bacterias, cada célula teóricamente estará lo suficientemente lejos de otras células como para formar su propia colonia. (En realidad, algunas colonias pueden ser descendientes de dos células cercanas, pero esto es raro en cultivos diluidos, por lo que el número de colonias es una muy buena estimación del número de células transferidas originalmente a la placa.) Debido a que la densidad de población es se desconoce, se deben usar una variedad de diluciones para terminar con una placa con un número apropiado de colonias.

Diluciones en serie

Rotule los seis tubos de ensayo (cada uno con 9 ml de crecimiento) media) de 1 a 6. Etiquete las seis placas de agar como 1 a 6. Utilice una pipeta y puntas de pipeta estériles de 1 mililitro (ml) para transferir 1 ml de cultivo bacteriano al tubo 1.

Mezcle bien y transfiera 1 ml del tubo 1 en el tubo 2 usando una pipeta y puntas estériles de 1 ml.

Repita el paso 2 para los tubos restantes, transfiriendo cada vez 1 ml del tubo usado más recientemente al siguiente tubo.

Use una pipeta y puntas estériles de 0.1 mL para transferir 0.1 mL del tubo 1 a una placa de agar. Encienda una varilla de vidrio en forma de L y úselo para extender la caída uniformemente alrededor de la placa. Incubar la placa durante 48 horas a una temperatura adecuada para las bacterias que se utilizan. Los diferentes tipos de bacterias tienen diferentes temperaturas de crecimiento óptimas. Si no puede encontrar la temperatura de crecimiento óptima con material de referencia, intente incubar las placas a 25 y 37 grados.

Repita el paso 4, transfiriendo cada vez líquido de un tubo de ensayo diferente a su placa correspondiente.
< h2> Cálculos de población

Observe las seis placas y elija una con 30 a 200 colonias aisladas.

Multiplique la cantidad de colonias en la placa por 10 para calcular la cantidad de células por ml de cultivo del tubo de dilución utilizado.

Multiplique el número del Paso 2 por 10 ^ (número de placa) para calcular el número de células por ml de cultivo original. El valor de 10 ^ (número de placa) es el factor de dilución del cultivo utilizado para inocular esa placa.

Consejo

Incluye todos los nutrientes requeridos en las placas de agar. Las bacterias auxótrofas requieren ciertos aminoácidos además de los ingredientes básicos de los medios. Diferentes auxotrofos tienen diferentes requerimientos de nutrientes. Consulte el material de referencia para averiguar qué aminoácidos, en su caso, necesita su bacteria.

Espere un segundo entre encender la varilla de vidrio y usarla, para no quemar la bacteria.

Advertencia

Use siempre guantes de laboratorio cuando manipule bacterias.