Lyse es una palabra que proviene del griego y simplemente significa "dividir" o "estallar". Acertadamente, los términos se refieren a lo que les sucede a las células en un tampón de lisis, una solución que las abre para extraer sus contenidos. Los científicos usan tampones de lisis cuando extraen ADN o proteínas de las células para el análisis, especialmente en el caso de las bacterias. El tipo de tampón de lisis celular varía según el tipo de experimento, aunque las siguientes son algunas opciones comunes.
TL; DR (demasiado largo; no se leyó)
Los tampones de lisis ayudan a rompa las celdas abiertas, para que se pueda acceder o eliminar su contenido. Algunos ejemplos incluyen sales, detergentes, agentes quelantes e inhibidores, y algunos productos químicos alcalinos.
Tampón y sal
Los tampones estabilizan el pH mientras las células se dividen. Tris-HCL se erige como uno de los químicos más comunes para amortiguar a pH 8. HEPES es otro químico amortiguador común en estos experimentos. La sal de cloruro de sodio también puede aumentar la fuerza iónica, la concentración total de solutos fuera de las células. Este último punto tiene cierta importancia ya que el agua puede difundirse a través de las membranas celulares desde regiones de baja concentración de soluto hasta regiones de alta concentración de soluto.
Detergentes disolventes
Los detergentes disuelven las membranas celulares para que el contenido de la célula pueda escapar. La estructura molecular tiene y anfipática (es decir, moléculas con un extremo que interactúa fácilmente con las moléculas de agua, mientras que el otro extremo hidrofóbico o "temeroso del agua" no). Pueden disolver las grasas formando micelas, pequeños grupos donde las colas hidrofóbicas de las moléculas de detergente apuntan hacia adentro hacia las moléculas de grasa. Los detergentes comunes incluyen dodecil sulfato de sodio, o SDS, NP-40 y tritonX.
Agentes quelantes e inhibidores
Los tampones de lisis también suelen incluir agentes quelantes como el ácido etilendiaminotetraacético (EDTA) o el ácido etilenglicol tetraacético (EGTA ) Estos productos químicos se unen a los iones metálicos con dos cargas positivas (por ejemplo, magnesio y calcio), por lo que no están disponibles para otras reacciones. Muchas ADNses (proteínas que mastican el ADN) y proteasas (proteínas que cortan otras proteínas) necesitan iones de magnesio para funcionar, por lo que al privarlos de este ingrediente clave, EDTA y EGTA ayudan a reducir el nivel de actividad de proteasa o ADNsa. Sin embargo, no lo descartan por completo, y algunas proteasas no dependen de cofactores de magnesio, por lo que los amortiguadores de lisis a veces también incluyen productos químicos llamados inhibidores de proteasas, que se unen a las proteasas y evitan que funcionen correctamente.
Lisis alcalina
La lisis alcalina, una técnica muy común para purificar plásmidos de bacterias, implica tres soluciones. El primero contiene glucosa, tampón tris-HCL, EDTA y RNAsas. La glucosa crea una alta concentración de soluto fuera de las bacterias, por lo que se vuelven un poco flácidas, lo que las hace más fáciles de lisar. El EDTA y el tris-HCL funcionan como ya se describió, mientras que la ARNasa absorberá cualquier ARN dentro de la célula para eliminarlo. La segunda solución en realidad lisa las células. Este contiene detergente SDS y NaOH, que eleva el pH a 12 o más, desnaturaliza las proteínas dentro de la célula y hace que el ADN se separe en cadenas individuales. La tercera solución contiene acetato de potasio para restablecer el pH a un nivel más neutro para que las cadenas de ADN plasmídico puedan volver a unirse. Mientras tanto, las proteínas desnaturalizadas se agrupan y precipitan, mientras que los iones dodecilsulfato se unen con los iones potasio para formar un compuesto insoluble, que también precipita de la solución.
