Los inhibidores de la proteasa son enzimas que inhiben las acciones de las proteasas, que son ciertas enzimas que destruyen las proteínas dentro de las células. Hay varias proteasas que se dirigen a diferentes proteínas. Por lo tanto, para preservar la funcionalidad de las proteínas después de la lisis celular, se usa una combinación o cóctel de inhibidores de proteasa. Estos están disponibles en forma de solución, tableta o en polvo.

Inhibidores de la proteasa

Preparan aprotinina, leupeptina y pepstatina en concentrados stock de 100uM (MicroMolar).

La aprotinina está disponible en forma de solución a una concentración de stock de 100 mM. Para hacer 1 ml (mililitros) de 100 uM, disuelva 1 ul (microlitro) en 999 ul de 1X PBS (Solución tampón fisiológica).
La leupeptina está disponible como un polvo. El peso molecular de Leupeptin es 475.6. Disuelva 100 μg (microgramos) de polvo en 2 ml de agua para obtener una concentración de 100 μM.

Para preparar Pepstatin, disuelva 100 μg de pepstatina en polvo en 1,45 ml de agua para obtener una concentración de 100 μM.

Todos estos pueden mezclarse o almacenarse individualmente a menos 80 grados Celsius.

Hacer PMSF (fluoruro de fenilmetilsulfonilo) en stock 100mM. PMSF viene en forma de polvo. El peso molecular de PMSF es 174.19. Disuelva 10mg de PMSF en 572 ul de etanol al 100 por ciento y almacene a 4 grados Celsius. Es sensible a la luz y debe almacenarse en la oscuridad.

Esto se agrega al tampón de lisis justo antes del uso.

Mezcle las proteasas juntas a las concentraciones requeridas. En general, se diluyen en un factor de 100 para su uso.

Consejo

Los cócteles de inhibidores de la proteasa comercialmente disponibles ahorran tiempo y son fáciles de usar. Vienen en forma de tabletas o soluciones.