La electroforesis en gel es una técnica de laboratorio de uso común con muchas aplicaciones prácticas que incluyen la toma de huellas digitales del ADN y la secuenciación del genoma. El proceso consiste en separar fragmentos de ADN usando una corriente eléctrica mientras se rastrea la velocidad del movimiento molecular a través de un gel filtrante.
Agregar colorante de rastreo azul o naranja a las muestras de ADN incoloro le permite ver su muestra y obtener información sobre cómo el ADN Las moléculas se mueven durante la electroforesis. La identificación se basa en el tamaño de las bandas de ADN en el gel después de la migración de moléculas.
Cómo funciona la electroforesis en gel
La electroforesis en gel extrae fragmentos de ADN a través de un gel usando una corriente eléctrica para aislar e identificar las moléculas de ADN por tamaño y carga eléctrica. El gel a menudo se hace con polvo de agarosa Se agrega agarosa a una solución tampón de agua y sal, y la mezcla se calienta y se enfría para formar un material poroso. gel que actuará como matriz de filtrado durante el procedimiento de electroforesis. Luego, el gel se coloca en una unidad de electroforesis y se cubre con una solución tampón que conduce la electricidad. Las soluciones que contienen ADN y colorantes de carga se pipetean en pequeños pocillos en el gel que se deben preparar durante la preparación del gel. Colorantes A electrodo positivo se encuentra en el extremo opuesto. Se coloca un estándar conocido de fragmentos de ADN en el primer pozo que creará una escalera de bandas de ADN para fines de comparación e identificación. La columna vertebral de fosfato de las moléculas de ADN le da al ADN una carga negativa. Los opuestos se atraen, por lo tanto, las moléculas de ADN son atraídas hacia el electrodo positivo y comienzan a moverse, o "migran", cuando se activa una corriente eléctrica. Los fragmentos de ADN de menor tamaño viajan más rápido que los fragmentos más grandes porque se encuentran menor resistencia a medida que migran a través de la matriz porosa del gel. Fragmentos de ADN de tamaño similar forman bandas de ADN en el gel. El ADN es incoloro, por lo que agregar tintes de seguimiento El colorante elegido no debe ser reactivo ni alterar el ADN. El azul de bromofenol es un colorante utilizado para rastrear hebras de ADN de menor tamaño que contienen aproximadamente 400 pares de bases, mientras que el xilen cianol es mejor para hebras de ADN más grandes con hasta 8,000 pares de bases. El tinte elegido no debe ser reactivo ni alterar el ADN. Al preparar su muestra de ADN para electroforesis, deberá agregar glicerol y agua junto con los colorantes de carga. El glicerol es una sustancia espesa y almibarada que le da más densidad a la muestra de ADN antes de insertarla en los pocillos en un extremo de la lámina de gel. Sin glicerol, la muestra de ADN se dispersaría en lugar de hundirse y formar un capa en el pozo como se supone que debe hacer para formar una escalera de ADN. La electroforesis en gel de poliacrilamida con dodecil sulfato de sodio (PÁGINA SDS) es una técnica adecuada para separar proteínas y aminoácidos , que son más pequeñas y más complejas que las moléculas de ADN lineales. Se utiliza poliacrilamida (gel SDS PAGE) en lugar de gel de agarosa para la electroforesis. Se agrega azul de bromofenol (BPB) al tampón de muestra como un tinte de rastreo que se mueve en la misma dirección de separación proteínas y demarca su borde de ataque. El colorante de unión al ADN, como el color naranja Se debe tener mucho cuidado al manipular este colorante mutagénico porque puede unirse al ADN en las células de la piel. A diferencia de los tintes de rastreo, el bromuro de etidio fluoresce
- un polisacárido extraído de algas marinas.
le ayudan a ver claramente la muestra
que está agregando a los pocillos de gel ubicados cerca del electrodo negativo de la unidad de electroforesis.
Cargando Propósito e Importancia del Tinte
a una muestra lo ayuda a a determinar velocidad de movimiento
de moléculas de proteínas de diferentes tamaños en el gel durante la electroforesis. Los ejemplos de colorantes de carga que se mueven con la muestra de ADN incluyen azul de bromofenol y xilen cianol.
Papel del glicerol en la electroforesis en gel de agarosa
Tinte de seguimiento en la PÁGINA SDS
Papel del colorante de unión al ADN
el bromuro de etidio se puede agregar al gel o al tampón de electroforesis. Como su nombre indica, el colorante se adhiere a la molécula de ADN.
brillantemente bajo luz UV, haciendo visibles las bandas de ADN.
