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    ¿Cuál es la secuencia de pasos más lógica para empalmar ADN extraño?

    No fue hace tanto tiempo que la ingeniería genética era parte de la ciencia ficción: hacer que un organismo crezca con las características de otro. Sin embargo, desde la década de 1970, las técnicas de manipulación genética han avanzado hasta el punto en que el empalme de ADN extraño en un organismo es casi rutinario. Por ejemplo, los genes para la resistencia a las plagas se pueden unir al maíz, los genes para hacer que la insulina humana se pueda poner en las bacterias y los genes para imitar los cánceres humanos se pueden poner en ratones de laboratorio. Los detalles del procedimiento son demasiado complejos para describirlos en un breve artículo, con muchas opciones en cada paso, pero el esquema conceptual de la secuencia lógica de pasos es bastante sencillo.

    Incubar el ADN del plásmido y el ADN de interés con una enzima de restricción. La enzima de restricción detectará una secuencia específica de bases de ADN y cortará el ADN en ese punto. Las enzimas de restricción se derivan del mecanismo de defensa de algunas bacterias contra el virus. Son moléculas que cortan el ADN donde detectan un patrón de bases dado.

    Incubar el plásmido cortado y los fragmentos de ADN genómico con ADN ligasa. Con la mayoría de las enzimas de restricción, el plásmido circular y los fragmentos de ADN genómico tendrán "extremos adhesivos" complementarios que se unirán entre sí. La ADN ligasa terminará de pegar las piezas juntas. El resultado es un grupo de plásmidos circulares que incluyen porciones del ADN genómico.

    Inserte los plásmidos en las bacterias y cultive las bacterias para que crezcan las colonias de organismos impregnados con ADN modificado. Si su plásmido tiene un gen resistente a los antibióticos que carece de la bacteria del hospedador, puede detectar automáticamente bacterias modificadas con éxito mediante el cultivo de la bacteria en un medio de cultivo infundido con antibióticos. Existen varios métodos para insertar los plásmidos en la bacteria, como utilizar una microaguja, aplicar un campo eléctrico para abrir pequeños agujeros en la membrana de la bacteria o simplemente colocar las bacterias y los plásmidos en la misma solución y dejar que la bacteria los absorba naturalmente.

    Muestra células de las diferentes colonias de bacterias modificadas. Lave las células muestreadas con una solución detergente para descomponer las membranas bacterianas y extraer el ADN, luego calentarlo o exponerlo a hidróxido de sodio para separar los filamentos. Esto expone la secuencia de bases del ADN al análisis.

    Incube el ADN con una sonda fluorescente. Brille una luz ultravioleta en el ADN incubado y observe la fluorescencia. La sonda consiste en una secuencia corta de ADN que coincide con el ADN genómico que ha insertado. Cuando la sonda coincida con el ADN que está buscando, brillará cuando se ilumine.

    Aisle las bacterias de las colonias que contienen el gen que está buscando insertar. Duplique su ADN dejando que crezcan las colonias bacterianas, o extraiga el ADN como lo hacía antes y duplíquelo en una máquina de reacción en cadena de la polimerasa.

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