Ácido desoxirribonucleico y proteínas. El ADN se organiza en unidades llamadas genes, cada una de las cuales codifica una secuencia particular de ARN o proteína. Los genes se estudian para aprender sobre la estructura y la función biológica, la evolución, la enfermedad y muchos otros aspectos de los sistemas vivos. Para estudiar los genes en detalle, el ADN debe aislarse y purificarse de las células de interés.
Extracción de ADN
Aunque el ADN de una sola célula se puede extraer y estudiar, no es suficiente para ver con el a simple vista. Para obtener una cantidad suficiente para el spooling, cuantas más células tenga para trabajar mejor (muchos millones).
Los protocolos exactos varían considerablemente para tener en cuenta las características únicas de muestras específicas, pero los pasos generales son la homogeneización, lisis, digestión, separación y recolección. El procedimiento se lleva a cabo mejor en un tubo de vidrio o plástico pequeño (según el tamaño de la muestra).
Por lo general, una muestra se mezcla o se tritura para separar completamente las células entre sí. Esto hace que los ingredientes de la célula sean más accesibles para los reactivos que siguen. A continuación, se añaden detergente o enzimas al homogeneizado para lisar las membranas celulares (y las membranas nucleares si las células son eucariotas) para liberar el ADN. En este punto, el ADN está rodeado de proteínas, lípidos, carbohidratos, todo lo demás que estaba contenido en las células.
Puede ser necesaria una digestión enzimática adicional para descomponer las proteínas, de modo que no se unan al ADN e interferir con su colección. El ADN se separa del resto del contenido celular al agregar alcohol frío, puro, etílico o isopropílico. El ADN no es soluble en estos alcoholes, por lo que se condensará para intentar minimizar su contacto con el alcohol. El ADN condensado luego se recolecta, generalmente mediante centrifugación o en cola.
ADN en espiral
La recolección de ADN mediante encolamiento es efectiva cuando se obtiene una gran cantidad de ADN de un procedimiento de extracción. También es un excelente método de demostración, ya que se puede ver claramente una maraña impresionante de ADN puro.
Para el ADN del carrete, el paso de separación debe llevarse a cabo con cuidado. Si no fue parte de la mezcla de reactivo de lisis añadida previamente, se debe agregar a la solución una solución concentrada de sal (cloruro de sodio) antes de la etapa de adición de alcohol. El alcohol frío se vierte lentamente por el costado del tubo de ensayo para formar una capa en la parte superior de la solución acuosa, evitando la mezcla. Si se hace correctamente, el alcohol formará su propia capa en la parte superior de la capa salada. Luego viene el spooling.
Para recolectar el ADN de la capa salada, coloque cuidadosamente una varilla de vidrio a través de la capa de alcohol hasta que toque el fondo del tubo. Gire lentamente la varilla entre los dedos, mientras mira la interfaz entre las dos capas. Si hay suficiente ADN presente, se acumulará en la interfaz entre las capas para formar una masa translúcida lechosa. Gire la varilla para envolver el ADN alrededor de ella (es decir, la parte que se enrolla) y extráigala del tubo. El ADN puede transferirse a otro tubo de alcohol puro para su almacenamiento o análisis posterior.
