1. Hidrólisis del éster del colesterol:
- colesterol esterasa (CE) hidroliza los ésteres de colesterol en colesterol libre y ácidos grasos.
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Colesterol éster + H2O → colesterol + ácido graso
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2. Oxidación del colesterol:
- colesterol oxidasa (chod) oxida el colesterol libre a Cholest-4-en-3-one y peróxido de hidrógeno (H2O2).
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Colesterol + O2 → Cholest-4-en-3-one + H2O2
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3. Reacción de peroxidasa:
- peroxidasa (pod) Cataliza la reacción entre H2O2 y un sustrato cromogénico, 4-aminofenazona (4-AP) , en presencia de un fenol, típicamente fenol 4-aminoantipirina (PAP) . Esto da como resultado la formación de un colorante de quinoneoneimina de color.
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H2O2 + 4-AP + PAP → Tinte de quinoneoneimina + H2O
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Puntos clave:
* Reacciones acopladas: Las reacciones están acopladas, lo que significa que el producto de una reacción sirve como sustrato para el siguiente. Esto asegura que la formación del producto coloreado sea directamente proporcional a la concentración inicial de colesterol.
* Medición espectrofotométrica: La intensidad del producto de color se mide utilizando un espectrofotómetro a una longitud de onda específica. La absorbancia es directamente proporcional a la concentración de colesterol.
* Calibración: El método requiere una curva de calibración utilizando estándares de colesterol conocidos para relacionar las lecturas de absorbancia con las concentraciones de colesterol.
Ventajas del método CHOD-PAP:
* Alta sensibilidad y precisión
* Relativamente simple y rápido
* Ampliamente disponible y estandarizado
Desventajas del método CHOD-PAP:
* puede verse afectado por la lipemia (niveles de triglicéridos altos) y la hemólisis
* requiere reactivos y equipos especializados
En general, el método CHOD-PAP es un método confiable y preciso para medir los niveles de colesterol en la sangre. Se usa ampliamente en laboratorios clínicos y se considera el estándar de oro para la determinación del colesterol.
