Tris, o tris (hidroximetil) aminometano, es un tampón biológico común, utilizado en todo el proceso de extracción de ADN. Durante la extracción de cualquier cantidad de fuentes, el ADN es sensible al pH. Durante la lisis celular, la eliminación de componentes celulares no deseados y la precipitación, se usa tris para mantener un pH estable. Además, desempeña un papel particularmente importante en la lisis celular.
TL; DR (demasiado largo; no lo leyó)
La extracción de ADN es un proceso sensible al pH y utiliza un tampón tris. ayuda a mantener estable el pH sobre la lisis y extracción celular.
Tris como tampón
Como el pH puede influir y ser influenciado por una serie de factores celulares, mantener un pH estable es esencial para la ciencia experimental . Los tampones biológicos, como los tris, son importantes porque pueden mantener un pH estable a pesar de las influencias que de lo contrario podrían cambiar el pH. Tris (hidroximetil) aminometano, con un pKa de 8.1, es un tampón eficaz entre pH 7 y 9. Debido a su rango neutral, tris es un tampón comúnmente utilizado en laboratorios biológicos. Sin embargo, el tampón tris es sensible a la temperatura y debe usarse a la temperatura a la que se ajustó originalmente para evitar imprecisiones.
Lisis de células
La lisis o la ruptura de las células abiertas es la primera paso de extracción de ADN Esto se logra mediante un tampón que contiene tris y EDTA (ácido etilendiaminotetraacético). EDTA se une a cationes divalentes como calcio y magnesio. Dado que estos iones ayudan a mantener la integridad de la membrana celular, eliminarlos con EDTA desestabiliza la membrana. Tris es el componente principal de almacenamiento en búfer; su función principal es mantener el pH del tampón en un punto estable, generalmente 8,0. Además, tris probablemente interactúa con el LPS (lipopolisacárido) en la membrana, lo que sirve para desestabilizar aún más la membrana.
Tris protege el ADN de los cambios de pH
Cuando las células se rompen, su ADN y el contenido se derrama en el buffer. Además, a menudo se incluyen RNasa A (destruye el ARN), proteasas (destruye las proteínas) y SDS (dodecil sulfato de sodio, solubiliza los fragmentos de la membrana). En conjunto, esta sopa de contenido celular y ARN y proteínas fragmentadas puede tener un gran impacto en el pH de la solución. Debido a que el ADN es sensible al pH, es importante que tampone la sopa y mantenga el pH en un punto constante.
Precipitación de ADN
En la etapa final de la extracción de ADN, el ADN en sí es extraído de la solución. En este punto, el ADN es soluble en el tampón. Para extraer de la solución, el ADN se hace insoluble mediante la adición de etanol o isopropanol (alcohol isopropílico). Cuando se hace esto, el ADN se vuelve obvio en solución como una sustancia filiforme blanca. Aunque el ADN puede aislarse de los componentes celulares restantes de esta manera, no es "utilizable" cuando es insoluble. Después del aislamiento, se elimina el alcohol y el ADN debe devolverse a un tampón biológico, como tris, para su uso.
Hágalo usted mismo
Aunque la extracción de ADN se realiza comúnmente en laboratorios de investigación Generalmente, utilizando uno de varios kits disponibles en el mercado, cualquiera puede extraer el ADN en el hogar utilizando artículos comunes para el hogar y arvejas o espinacas. En este caso, tris, ni ningún tampón biológico, no está presente para proteger el ADN de los cambios de pH. Sin embargo, es una forma visual de ayudar a los estudiantes a conectarse con el ADN celular.
