Enterobacter aerogenes y otras especies de Enterobacteriaceae son fáciles de identificar usando el kit de prueba API-20E. Este kit, fabricado por bioMeriuex Inc., incluye 20 mini-tubos o pozos para la prueba. La prueba consiste en inocular una suspensión bacteriana pura en los pocillos de prueba y leer las reacciones de color que se producen. La identificación se basa en convertir los resultados de estas reacciones de color en un código de siete dígitos conocido como el Índice de perfil analítico. La coincidencia de este código con la base de datos del fabricante proporciona una identificación del organismo.
Aísle el organismo que desea identificar en un medio de cultivo específico para Enterobacteriaceae. Utilice el kit de prueba API 20E solo con cultivos puros y no directamente en muestras de cultivo mixto.
Abra una ampolla que contenga 5 ml de cloruro de sodio al 0,85 por ciento de medio. Retire una sola colonia de una placa de aislamiento de 18 a 24 horas con una pipeta y agréguela a la ampolla. Mezcle para obtener una suspensión homogénea. Use esta suspensión tan pronto como termine de prepararla.
Instale una caja de incubación que consiste en pocillos alveolados en una bandeja con tapa. Abra la caja y agregue 5 ml de agua desmineralizada o destilada en los pocillos de la bandeja. Desempaque la tira provista en el kit de prueba API 20E y colóquela en la caja de incubación.
Llene el tubo y la cápsula de los pocillos marcados como "GEL", "VP" y "CIT" con la suspensión he preparado. En los pocillos restantes, llene la suspensión bacteriana en el tubo, pero no en la cúpula. Agregue aceite mineral a los pozos marcados como "ADH", "ODC", "LDC", "URE" y "H2S" para crear un ambiente anaeróbico.
Cubra la caja de incubación con la tapa e incube en un lugar temperatura entre 34 y 38 grados Celsius durante 18 a 24 horas.
Observe los pozos y observe las reacciones en la hoja de resultados. Siempre que haya un mínimo de tres pruebas positivas, proceda a las reacciones de color utilizando las soluciones de prueba química, o los reactivos, que vienen con el kit. Agregue una gota de reactivo TDA en el marcado "TDA" y coloque cada uno de los reactivos VP1 y VP2 en el "VP" bien marcado. Si resultaron positivas menos de tres pruebas, incube las tiras durante otras 24 horas antes de agregar estos reactivos.
Observe los cambios de color producidos en los pocillos. Un color marrón rojizo en TDA indica una reacción positiva. Espere 10 minutos después de agregar los reactivos del kit en VP1 y VP2. Considere un color rojo o rosado como positivo y un color rosa pálido que aparece después de 10 minutos como negativo.
Agregue una sola gota del reactivo JAMES del kit de prueba al bien marcado "IND". Considere la posibilidad de un color rosado en toda la cúpula como una reacción positiva.
Realice la prueba de oxidasa especificada por el fabricante del kit y anote sus resultados junto con los resultados de las 20 pruebas anteriores.
Use la tabla de lectura proporcionada con el kit de prueba para asignar valores a las reacciones observadas en cada uno de los pocillos de prueba. Agregue estos valores según lo prescrito para obtener el número de perfil de siete dígitos.
Introduzca este número de perfil de siete dígitos en la base de datos del fabricante del kit a través de un teléfono de tonos. Espere a recibir la identificación proporcionada por la base de datos. Si el número de perfil no proporciona resultados específicos, realice las pruebas adicionales especificadas por el fabricante del kit.
