Los científicos y técnicos a menudo necesitan calcular la concentración de células en una suspensión. Por ejemplo, cuando un paciente obtiene su extracción de sangre en el consultorio de un médico, el laboratorio puede usar ciertos métodos para buscar la cantidad de glóbulos blancos en un volumen dado de sangre. Esto le da al médico mucha información sobre la salud de su paciente, especialmente su sistema inmune y si está luchando contra una infección u otra enfermedad. Las pruebas de este tipo pueden buscar muchas otras células en la sangre, así como líquido cefalorraquídeo y otros fluidos corporales, como los recuentos de espermatozoides en el semen con fines de fertilidad. Los científicos también calculan las concentraciones celulares de bacterias, levaduras y otros microorganismos para numerosos fines que van desde la investigación ecológica a las tecnologías industriales. Una de las técnicas más comunes también se enseña en muchas clases de biología de la universidad, y utiliza un dispositivo llamado cámara de conteo.

Diluir la muestra

Antes de que la suspensión celular pueda entrar en la cámara de conteo , podría necesitar dilución porque podría contener miles o millones de células. En ese caso, las células no pueden ser contadas razonablemente. Para diluir la muestra, use una pipeta estéril para colocar diez microlitros de la solución de células en un tubo de ensayo que contenga 90 microlitros de un diluyente. El tipo de dilutante dependerá del tipo de célula. Mézclalo bien. Esta solución ahora está diez veces más diluida que la muestra inicial, por lo que su factor de dilución es 10 ^{-1. Etiquetalo. Repita esto varias veces, usando una pipeta estéril cada vez, hasta que la solución se diluya lo suficiente. Si lo diluyó por segunda vez, el segundo tubo de ensayo se diluyó 100 veces más que la solución inicial, por lo que el factor de dilución fue 10 -2 y así sucesivamente.}

Contando las células

Es posible que deba probar varias diluciones para determinar el factor de dilución correcto para la cámara de recuento. Una cámara de conteo es básicamente una caja rectangular muy pequeña, clara, con una profundidad precisa y una cuadrícula precisa inscrita en la parte superior. También se conoce como un hemocitómetro, o a veces un hemacitómetro. El objetivo es que la suspensión se diluya lo suficiente como para que, cuando se vea en la cámara de recuento, no se superpongan las células y se distribuyan por toda la red de manera uniforme. Pipetee la suspensión diluida que contiene las células en el pocillo de la cámara de recuento, donde se instalará en la cámara de rejilla mediante acción capilar. Coloque la cámara de recuento en la platina del microscopio y visualícela con poca potencia.

La rejilla contiene cuadrados que están formados por cuadrados aún más pequeños. Seleccione aproximadamente cuatro o cinco cuadrados, o la cantidad que necesite para contar al menos 100 celdas, en un patrón de su elección, como las cuatro esquinas y el cuadrado central. Si las celdas son grandes, pueden ser cuadrados grandes, pero si las celdas son pequeñas, puede elegir los cuadrados más pequeños en su lugar.

Calcular la concentración

El volumen específico de cada cuadrícula puede varían según el fabricante de la cámara de recuento, pero a menudo, la profundidad de la cámara es de 0.1 milímetros, el área de los cuadrados grandes es de 1 milímetro cuadrado, y el área de los cuadrados más pequeños es de 0.04 milímetros cuadrados. Los cuadrados más grandes, entonces, tienen un volumen de 0.1 milímetros en cubos. Para este ejemplo, suponga que contó un total de 103 células en cinco cuadrados y que diluyó la muestra inicial hasta que el factor de dilución fue 10 ^-2.

Si cada cuadrado de la cuadrícula tiene un volumen de 0.1 Se contaron los milímetros cúbicos y cinco, luego el volumen total de la cámara que se contó fue de 0,5 milímetros cúbicos, y había 103 células. Duplicó para hacer que 1 milímetro cúbico lo convirtiera en 206 celdas. Un centímetro cúbico equivale a 1 mililitro, que es una medida útil para líquidos. Hay 1,000 milímetros cúbicos en un centímetro cúbico. Por lo tanto, si hubiera habido un centímetro cúbico, o un mililitro, de suspensión, habría contado 206,000 (206 x 1,000) celdas. Esto es lo que parece como una ecuación:

Volumen del cuadrado de la cuadrícula × número de cuadrados contados = volumen total de la suspensión contada

Número de células ÷ volumen de la suspensión contada = conteo de células por milímetros en cubos

Conteo de células por milímetros en cubos × 1000 = conteo de células por mililitro

Cálculo de concentración sin diluir

Deberá tener en cuenta cualquier dilución realizada para hacer que la solución inicial cuente bajo el microscopio En este ejemplo, el factor de dilución es 10 ^{-2. Para calcular la concentración inicial de la solución:}

Recuento de células por mililitro ÷ Factor de dilución = Concentración de células

Para este ejemplo, el recuento de células por mililitro es 206,000 y se divide por 10 ^{-2 (0.01) da una concentración celular de 20,600,000 células por mililitro en la muestra inicial.}