El análisis de ADN implica diferentes tipos de experimentos moleculares y procedimientos biológicos. El ADN es una materia prima frágil y complicada, por lo que su manejo y análisis requiere la mejor calidad y la más pura preparación de los productos químicos. Dependiendo del análisis, cientos de sustancias químicas, desde soluciones ácidas y básicas hasta tampones y colorantes, están involucradas en el estudio del ADN. Comprender por qué se usan algunos productos químicos es clave para realizar experimentos exitosos y obtener resultados precisos, confiables y reproducibles.
Etilendiaminotetraacetato para la purificación del ADN
Se purifican tres tipos de ADN para el trabajo científico: el ADN del genoma (ADN genómico), el ADN completo de la célula (ADN total) o de plásmidos, que pueden auto-multiplicarse. La purificación total del ADN celular utiliza sustancias químicas que permiten la destrucción de muchas membranas celulares durante la lisis celular. El etilendiaminotetraacetato (EDTA) químico a menudo se usa para eliminar los iones de magnesio, necesarios para mantener la rigidez de las paredes celulares, debilitándolos hasta el punto de colapsarse o desgarrarse, liberando el contenido celular y el ADN para su análisis. Además, EDTA protege y preserva la integridad del ADN mediante la inhibición de las enzimas que normalmente están presentes en la célula, que pueden fragmentar el ADN y dejarlo inutilizable.
Cloruro de Magneisum para Amplificación de ADN <<> La reacción en cadena de la polimerasa (PCR) es un sofisticado método de análisis utilizado para amplificar varios miles de copias de una molécula de ADN, sin embargo, está plagado de problemas técnicos e imprecisiones. Muchos científicos, por lo tanto, rutinariamente realizan varios conjuntos diferentes de PCR para encontrar la condición y los parámetros más óptimos para un gen particular de interés. Un químico utilizado para llevar a cabo dicha optimización es el magnesio, que estabiliza la enzima ADN polimerasa utilizada en la PCR y actúa como un co-factor esencial para la actividad de la enzima. Para las PCR, el magnesio se usa en forma de un tampón de cloruro de magnesio.
Bromuro de etidio para la tinción de ADN
El bromuro de etidio es un colorante que se une al ADN al deslizarse entre los nucleótidos que lo componen una doble hélice de ADN en un proceso conocido como intercalación. Este tinte se puede iluminar con una lámpara ultravioleta, de modo que se pueda visualizar el ADN al que se ha unido el bromuro de etidio. Sin embargo, se requiere al menos 1 nanogramo de ADN para que se vea correctamente el bromuro de etidio, por lo tanto, es una forma de detectar ADN amplificado por PCR. Aunque es barato y ampliamente utilizado, también es una sustancia química mutagénica que se sabe que causa cáncer, por lo que su uso en laboratorios está muy regulado y muchos científicos están adoptando alternativas menos tóxicas.
