La electroforesis en gel es un método utilizado en laboratorios para medir y clasificar hebras de ADN. Es necesario porque el ADN en condiciones normales es demasiado pequeño para manipularlo, incluso cuando se lo utiliza con la mayoría de los microscopios. La electroforesis en gel es un procedimiento relativamente sencillo, y la misma técnica básica se puede utilizar para separar proteínas individuales, también.

The Gel Matrix

Para comenzar la electroforesis en gel, primero debe crear el gel . Por lo general, los geles se hacen en láminas delgadas usando una sustancia llamada agarosa. La agarosa en polvo se coloca en un matraz, seguido de una solución de agua salada llamada tampón. Esta mezcla de agarosa y tampón se calienta hasta que las dos sustancias se funden y luego se vierten en un molde de formación. Luego se coloca un dispositivo llamado peine en un extremo del molde antes de que el gel se enfríe. Cuando se enfría el gel, se retira el peine, dejando pequeñas ranuras que se usarán para guardar muestras de ADN.

Una característica especial de la mezcla de agarosa enfriada (llamada matriz de gel) radica en el hecho de que es creado con agua salada. Cuando se electrifica, la matriz se volverá conductiva, permitiendo que la electricidad fluya a lo largo de su longitud. Otra propiedad especial de la matriz de gel es la presencia de orificios microscópicos regulares. Estos agujeros permitirán que las cadenas de ADN viajen a través de la matriz de gel y faciliten el proceso de clasificación.

La cámara de electroforesis

El siguiente paso es crear una cámara de electroforesis. Esta es una pequeña caja rectangular, conectada con una conexión eléctrica positiva y negativa en cada extremo. Las cámaras son generalmente poco profundas, lo suficientemente pequeñas como para caber sobre una mesa y construidas con materiales transparentes como Plexiglas.

La solución de agua salada se vierte en el fondo de la cámara de electroforesis y la matriz de gel se sumerge ligeramente dentro de esta solución . El agua salada tiene dos propósitos: ayudar al flujo de electricidad y mantener la matriz del gel húmeda. Dado que el ADN es impulsado por una carga negativa, coloque su matriz de modo que sus muestras se ubiquen al lado de su conexión eléctrica negativa.

Preparando el ADN

Luego se preparan muestras de ADN. Como el ADN en solución es casi imposible de ver, se agrega un agente colorante llamado tampón de carga a cada muestra individual. Este agente también espesa la solución de ADN, por lo que es menos líquida y más viable. Con una pipeta, transfiera una muestra de solución de ADN a cada ranura alterna en la matriz de gel. En el espacio vacío entre cada muestra, coloque una solución de ADN cuya longitud ya conozca (llamada estándar de ADN) para el control y la comparación del experimento.

Encienda la alimentación

Ahora, encienda su cámara de electroforesis. Bajo potencia negativa, tus muestras de ADN serán forzadas a lo largo de la cámara. Pequeñas cadenas de ADN se moverán más rápidamente a través de la matriz de gel, y en un corto período de tiempo se separarán de las cadenas más largas y lentas. El tinte en el agente colorante le permite seguir la pista del ADN. No podrás ver hebras individuales de ADN, pero hebras de la misma longitud se agruparán.

Pasos finales

Cuando se resuelve el ADN, la matriz se elimina de la electroforesis. cámara. El ADN se tiñe para permitir una medición y un examen más fáciles.