La electroforesis en gel es uno de los principales métodos utilizados en biología molecular para el análisis del ADN. Este método implica la migración de fragmentos de ADN a través de un gel, donde se separan en función del tamaño o la forma. Sin embargo, incluso un método científicamente sólido como la electroforesis en gel no es inmune a los errores.
Cómo funciona la electroforesis
La electroforesis en gel implica el uso de un gel generalmente hecho de polímeros como la agarosa. El gel se sumerge en una solución tampón que conduce un campo eléctrico. La muestra de ADN de interés primero se fragmenta usando enzimas de restricción y luego se inyecta en el gel. Cuando se enciende el campo eléctrico, los fragmentos de ADN en el gel migran hacia el electrodo positivo. Si los fragmentos de ADN son de diferentes tamaños, los tiempos de migración serán diferentes para cada fragmento de tamaño. Los fragmentos son luego visualizados usando un tinte o autorradiografía y son visibles como bandas en el gel.
Contaminación de la muestra
La principal aplicación de la electroforesis es como una herramienta para el análisis del ADN en la biología molecular, pero también se usa en medicina forense como un medio para identificar muestras de una escena del crimen. Es importante minimizar las fuentes de errores en esta técnica para obtener resultados precisos. Una fuente de error es la contaminación de la muestra de ADN. Si hay ADN extraño en la muestra, el gel tendrá más bandas de las que se encontrarían en un gel que contiene solo la muestra purificada.
Problemas con el gel, la corriente y el tampón
la concentración del gel también debe ser correcta para evitar errores. Si la concentración es demasiado alta o demasiado baja, los fragmentos migrarán muy despacio o demasiado rápido. Esto dará lugar a errores en la resolución de las diferentes bandas. Durante la ejecución de la electroforesis, se debe tener cuidado para garantizar que el voltaje sea constante. Cualquier fluctuación en el voltaje dará como resultado una migración inestable de fragmentos de ADN, lo que generará errores al leer las bandas. La solución tampón también debe tener la composición correcta, ya que un tampón con un pH incorrecto o una concentración iónica cambiará la forma de los fragmentos de ADN, y también cambiará sus tiempos de migración.
Visualización adecuada
Lo más importante es que el gel debe visualizarse correctamente. Si la concentración del colorante o de la sonda radiactiva utilizada para visualizar las muestras es demasiado alta, la imagen resultante será muy desordenada, ya que los fragmentos residuales también se visualizarán. Si la concentración de gel es demasiado baja, no habrá visualización. Cuando se han seguido los procesos correctos durante todas las etapas, la electroforesis en gel arrojará resultados que son precisos y se pueden usar con gran confianza. Al igual que con todos los procedimientos científicos, la electroforesis en gel puede ser propensa a errores, pero estos pueden minimizarse con la preparación y el manejo adecuados.
