Western blot, una técnica analítica utilizada para identificar una proteína específica en una muestra determinada, emplea la capacidad de una enzima o un anticuerpo primario marcado con fluorescencia para unirse a su antígeno específico. Es un proceso de tres pasos que comienza con electroforesis en gel, seguido de transferencia de membrana y sondaje con anticuerpos. La detección de proteínas puede ser directa o indirecta, y esta última usa un anticuerpo secundario marcado dirigido contra el primario. Aunque se acepta como una técnica de análisis de proteínas de rutina, Western Blot tiene limitaciones y beneficios.
Ventaja: Sensibilidad
Uno de los principales argumentos a favor de la inmunotransferencia es su sensibilidad. Debido a su capacidad para detectar tan poco como 0.1 nanogramos de proteína en una muestra, la técnica teóricamente puede servir como una herramienta de diagnóstico temprana eficaz, detectando incluso la más mínima respuesta inmunogénica de un virus o bacteria en una muestra de paciente. Una transferencia Western indirecta se basa en esta sensibilidad de la capacidad del anticuerpo secundario para amplificar la intensidad de la señal detectada por el sistema de imágenes. Una mayor sensibilidad significa que se necesitan menos anticuerpos para las pruebas, lo que reduce significativamente los costos de laboratorio.
Ventaja: Especificidad
La técnica de transferencia Western debe su especificidad a dos factores importantes. Primero, la electroforesis en gel clasifica una muestra en proteínas de diferente tamaño, carga y conformación. Este proceso en sí mismo es un gran paso hacia la detección, ya que las bandas formadas en el gel ya dan pistas sobre el tamaño de la proteína o polipéptido de interés. La especificidad de la interacción anticuerpo-antígeno sirve como el segundo factor importante. Debido a que los anticuerpos específicos muestran afinidad por proteínas específicas, el proceso puede detectar selectivamente una proteína diana incluso en una mezcla de 300,000 proteínas diferentes.
Desventaja: propensa a resultados falsos o subjetivos
A pesar de su sensibilidad y especificidad, una western blot aún puede producir resultados erróneos. Un resultado falso positivo cuando un anticuerpo reacciona con una proteína no deseada, que es lo que ocurre con frecuencia cuando un paciente que se somete a la prueba del VIH tiene tuberculosis o una serie de infecciones parasitarias. Un falso negativo, por otro lado, puede resultar fácilmente si las proteínas más grandes no tienen suficiente tiempo para transferirse adecuadamente a la membrana. El borrado y el procesamiento incorrectos a menudo producen bandas sesgadas, difuminadas o incluso múltiples, por lo que los resultados de las pruebas están sujetos a la interpretación del técnico.
Desventaja: Alto costo y demanda técnica
El costo de un western blot es un compuesto de los grandes gastos individuales para anticuerpos etiquetados, analistas expertos y equipos de laboratorio. Un proceso delicado, el Western Blot requiere precisión en cada paso para la identificación adecuada de los constituyentes de una muestra. Un error menor en la concentración de reactivo o en el período de incubación puede ser desastroso para todo el proceso. Finalmente, el equipo requerido para la detección e imágenes - sistemas de detección de quimioluminiscencia, fluorescentes, radioactivos o láser - puede ser demasiado costoso para la unidad de microbiología promedio.
